| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
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細(xì)胞炎癥因子檢測試劑盒說明書
一、檢測原理
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測樣本中的細(xì)胞炎癥因子水平。
向預(yù)先包被有細(xì)胞炎癥因子捕獲抗體的微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)恒溫溫育、充分洗滌后，加入TMB底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。TMB可在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，最終在酸性終止液作用下轉(zhuǎn)為黃色。
樣本顏色深淺與其中細(xì)胞炎癥因子的含量呈正相關(guān)，使用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定各孔吸光度(OD值)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計(jì)算樣品中炎癥因子的濃度。
二、試劑盒組成
試劑盒各組分規(guī)格、配置及保存條件如下表所示，所有試劑常規(guī)保存溫度為2-8℃。
| 組分名稱 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存條件 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 常溫 |
| 封板膜 | 2片 | 2片 | 常溫 |
| 密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 常溫 |
| 酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃ |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃ |
| 酶標(biāo)試劑 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃ |
三、樣本處理要求
為保障檢測結(jié)果精準(zhǔn)可靠，避免樣本降解、污染導(dǎo)致結(jié)果失真，樣本采集與處理需嚴(yán)格遵循以下要求：
及時(shí)處理：患者樣本采集后需立即進(jìn)行預(yù)處理，杜絕延遲處理引發(fā)的樣本變質(zhì)、結(jié)果偏差問題。
樣本類型：可檢測樣本包括人體血液、血清、血漿、組織液等各類生物體液及組織樣本。
低溫保存：未及時(shí)檢測的樣本需置于低溫環(huán)境儲(chǔ)存，防止長時(shí)間放置導(dǎo)致樣本中炎癥因子降解失效。
避免反復(fù)凍融：嚴(yán)格杜絕樣本多次凍融循環(huán)，反復(fù)凍融會(huì)破壞樣本有效成分，影響檢測準(zhǔn)確性。
規(guī)范預(yù)處理：所有樣本需嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求完成前期處理、稀釋等操作，保證樣本純度達(dá)標(biāo)。
操作防護(hù)：操作人員全程佩戴手套、口罩等防護(hù)用品，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，避免樣本交叉污染及人身暴露風(fēng)險(xiǎn)。
四、詳細(xì)操作步驟
本操作流程為通用標(biāo)準(zhǔn)步驟，不同批次試劑盒略有差異，實(shí)際操作請(qǐng)以配套說明書為準(zhǔn)。
樣品加樣：將預(yù)處理完成的待測樣品(血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等)、標(biāo)準(zhǔn)品依次加入酶標(biāo)包被板微孔中。
試劑添加：按說明書配比與順序，向各微孔加入配套酶標(biāo)檢測抗體等試劑，保證加樣均勻、無氣泡。
恒溫孵育：將加樣完成的孔板置于37℃恒溫環(huán)境中靜置孵育，使試劑與樣本中炎癥因子發(fā)生特異性免疫結(jié)合反應(yīng)。
洗板除雜：孵育結(jié)束后，用稀釋后的洗滌液充分洗滌微孔，洗去未結(jié)合的雜質(zhì)、多余試劑，消除檢測誤差。
顯色反應(yīng)：依次加入顯色劑A液、B液，避光靜置反應(yīng)，使樣本充分顯色。
終止反應(yīng)：顯色完成后，加入終止液終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色穩(wěn)定轉(zhuǎn)為黃色。
信號(hào)檢測：使用酶標(biāo)儀在450nm波長條件下，測定各孔吸光度(OD值)并記錄數(shù)據(jù)。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，代入樣本OD值，計(jì)算出待測樣本中細(xì)胞炎癥因子的實(shí)際濃度及稀釋校正后最終含量。
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出后，需室溫平衡15-30分鐘方可使用；酶標(biāo)包被板未用完的板條，需裝入密封袋密封保存。待測樣本使用前需室溫平衡60分鐘。
20×濃縮洗滌液低溫環(huán)境可能出現(xiàn)結(jié)晶析出，屬于正常現(xiàn)象，可溫水浴加溫助溶，溶解后使用不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
全程加樣需使用校準(zhǔn)合格的加樣器，定期校對(duì)精度，規(guī)避加樣誤差；單次整板加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，樣本數(shù)量較多時(shí)建議使用排槍加樣。
每次檢測必須同步做標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)先設(shè)置復(fù)孔檢測，提升數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)品最高孔OD值，需用樣品稀釋液稀釋樣本后重新檢測，最終結(jié)果需乘以對(duì)應(yīng)總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
封板膜為一次性耗材，僅限單次實(shí)驗(yàn)使用，嚴(yán)禁重復(fù)使用，防止交叉污染。
顯色底物需避光密封保存，避免光照失效，影響顯色效果。
嚴(yán)格遵循說明書操作，所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定均以酶標(biāo)儀儀器讀數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，禁止肉眼主觀判讀。
實(shí)驗(yàn)所用樣本、洗滌液、廢棄耗材均按傳染性實(shí)驗(yàn)廢棄物規(guī)范處理，做好生物安全防護(hù)。
試劑盒不同批號(hào)組分性能存在差異，嚴(yán)禁跨批號(hào)混用試劑，避免實(shí)驗(yàn)失效。
中英文說明書內(nèi)容存在歧義時(shí)，以英文說明書標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)。
